超声细胞破碎仪的破碎率受多种因素影响,在优化条件下,其破碎率可达90%以上,但在实际应用中一般根据具体需求选择合适的参数和条件,以达到理想的破碎效果,以下是具体介绍:
1、影响破碎率的因素
超声功率:功率越大,产生的空化效应和机械剪切力越强,越有利于细胞破碎。但功率过高可能会导致样品温度过高,使生物大分子变性失活,还可能对仪器造成损坏。
超声时间:适当延长超声时间通常能提高破碎率,但过长的时间可能使已破碎的细胞碎片进一步细化,增加后续分离纯化的难度,也会使样品温度过度升高。
样品浓度:细胞浓度过高,会使超声能量分散,影响破碎效果;浓度过低,则会浪费仪器资源和时间。一般来说,需要根据细胞类型和仪器性能选择合适的样品浓度。
细胞类型:不同类型的细胞结构和细胞壁组成不同,对超声的耐受程度也不同。例如,细菌的细胞壁较厚,需要较高的超声功率和较长的时间才能破碎;而动物细胞相对脆弱,更容易被超声破碎。
2、典型的破碎率范围
在实验室中,对于一些常见的细胞,如大肠杆菌等原核细胞,在优化的超声条件下,破碎率可以达到90%以上。对于动物细胞,如HeLa细胞等,破碎率也能达到较高水平,通常在80%-95%左右。对于植物细胞,由于其有细胞壁的保护,破碎难度较大,超声细胞破碎仪的破碎率一般在60%-80%左右。
实际操作中,应通过预实验优化超声参数,在保证细胞破碎率的同时,尽量减少对目标产物的影响。此外,还可以结合其他细胞破碎方法,如酶解法、化学法等,以提高破碎效果和破碎率。
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